Som ung ägnade Glans sin fritid åt att spela schack i Eslövs Schackklubb. Ett annat ungdomsintresse har varit James Bond och han har varit med i SVT:s frågesportprogram Kvitt eller dubbelt, där han tävlat i ämnet.
Glans gjorde sin debut som ståuppkomiker på Kramer i Malmö i oktober 1994. Han belönades med Bubbenpriset 1998 och han utsågs på Svenska Stand up-galan 2003 till Årets manliga komiker.
Glans har medverkat i flera humor- och satirprogram som till exempel Parlamentet i TV4, tv-programmen Räkfrossa och Kvarteret Skatan och han har medverkat i program som exempelvis Släng dig i brunnen, Extra Extra! Morgonsoffan i SVT och Sverige dansar och ler samt Sverige pussas och kramas i Kanal 5.
Han hade huvudrollen som Nisse Hult i SVT-komediserien Nisse Hults historiska snedsteg och spelade Reine Bok i tv-serien Hjälp!. Han har även uppträtt på Stockholm Live.
Den 29 oktober 2008 gav han ut dvd-filmen Johan Glans – World Tour of Skåne, inspelad i Helsingborgs konserthus den 5 juni 2008. Filmen är en ståupp-show från en turné runt om i Skåne. Den 9 och 10 november samma år, gästspelade han på Hotell Rival vid Mariatorget på Södermalm.
Under åren 2010–2012 medverkade Glans i Monty Python-musikalen Spamalot på Nöjesteatern i Malmö och på Oscarsteatern i Stockholm.
Johan Glans belönades 2011 med såväl Karamelodiktstipendiet som Tidskriften OPERA:s Musikalpris. 2012 utsågs han till Årets skåning.
Våren 2014 var Glans en av programledarna i UR:s dokumentärserie om TV-historia, Programmen som förändrade TV.
Våren 2016 medverkade Johan Glans som lagledare i SVT:s nya humorprogram ”Tror du jag ljuger?” tillsammans med Anna Mannheimer som programledare och Fredrik Lindström som lagledare för motståndarlaget. Alla tre har medverkat i samma roller i senare säsonger.
Under året 2016 spelade han också en av huvudrollerna i den nya svenskamerikanska webb-tv-serien Swedish Dicks som gick att strema på Viaplay och sändes på TV3 i Sverige. I USA så sändes den av Lionsgate.
År 2018 tilldelades han Piratenpriset.